液相色譜柱選擇困難？看準(zhǔn)這些讓你事半功倍

很多時候，實驗室的小伙伴們都是參照標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行實驗，可標(biāo)準(zhǔn)上一句“以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”就足夠讓小伙伴們選擇困難癥犯，更不用說是自己做方法開發(fā)的實驗了。的確，色譜是一門實驗學(xué)科，沒有誰能在未做實驗的情況下預(yù)測出哪一根色譜柱能完成分離任務(wù)，尤其是當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)沒有明確推薦色譜柱品牌型號的時候，這也就導(dǎo)致很多小伙伴經(jīng)常內(nèi)心OS：C18柱那么多，哪個才能分的Z hao？

別急，雖然我們不能準(zhǔn)確地預(yù)測實驗結(jié)果，但把握基本的色譜柱性能參數(shù)還是可以做到的。下面就聽小編細(xì)細(xì)道來。

01 載碳量

*，反相C18在當(dāng)今色譜分離領(lǐng)域依舊承擔(dān)著ji大比例的分離任務(wù)，就是因為其性質(zhì)適合大多數(shù)化合物的色譜分離，那么在選擇色譜柱的時候，就一定要注意色譜柱本身的適用性，盡可能選擇普適性強，適用面廣的色譜柱，而C18柱的“載碳量”這一參數(shù)，就是尤為重要的參數(shù)之一。

對于一根普適性強的C18色譜柱，載碳量參數(shù)是在10%~20%之間，尤以20%附近z佳（16%-22%），因為這樣比例略高的載碳量，在保證了化合物能有效保留的前提下，活性位點數(shù)量減小，出現(xiàn)殘留吸附的情況也會減小。另外，稍高于普通C18的鍵合密度也有助于色譜鍵合相選擇性的提高。

02 硅膠純度

除了特殊情況以外，越是適用性強的填料越要選擇B型硅膠。B型硅膠的硅膠純度＞99.999%，金屬離子含量＜10 ppm，并且孔徑和粒徑分布更加均勻，這樣得到的色譜峰展寬更小，峰形更加對稱。

03 封尾

不同品牌色譜柱的封尾工藝和封尾試劑不一樣，這也是導(dǎo)致都是C18，性質(zhì)差異卻較大的原因之一。除非標(biāo)準(zhǔn)特殊說明使用未封尾色譜柱，一般情況下，優(yōu)先選擇使用封尾的色譜柱（End-Capped），尤其是雙封尾色譜柱，進(jìn)行實驗。

04 比表面積

可能很多小伙伴都會有意無意地忽略掉色譜柱的比表面積這個參數(shù)，其實這也是影響色譜柱性能的一個很重要的參數(shù)。比表面積的大小，將影響到鍵合相覆蓋率的高低，以及目標(biāo)物與鍵合相發(fā)成相互作用的概率大小。比表面積的大小，還會影響梯度平衡時間的長短。那么，在選擇普適性強的色譜柱的時候，盡可能選擇比表面積在180m²/g~450m²/g的色譜柱，像常見的320m²/g，350m²/g，420m²/g，450m²/g，都是適用面比較廣的。

05 孔徑

孔徑的選擇取決于分子量的大小。一般來說，要求孔徑是分子直徑三倍以上，這樣分子才能順利進(jìn)入孔中有所保留。以分子量2000為界，分子量＜2000，可以選擇100Å、120Å、150Å等孔徑；分子量＞2000，如多肽，核酸等大分子的分離，可以選擇300Å，甚至孔徑更大的色譜填料。

06 色譜柱規(guī)格

如果標(biāo)準(zhǔn)上有*具體的色譜柱規(guī)格，那無需多言。但當(dāng)我們自己在做方法開發(fā)的時候，無從得知什么規(guī)格合適，而柱長、內(nèi)徑、粒徑的不同又會影響到柱效、分離度、保留時間等系統(tǒng)適用性值，選擇的不合適還可能造成色譜柱壓力過高或污染。因此，保險起見，小伙伴們一開始可以選擇4.6×250mm，5μm的色譜填料，這樣5μm粒徑柱壓不會很高，也便于沖洗維護(hù)；柱長夠長，多組分樣品也具有一定的分離效率；柱內(nèi)徑也不至于太小而造成超載。

07特殊基團(tuán)

特殊基團(tuán)一般是指為了使得色譜填料具有*的特性和不一樣的選擇性，從而在色譜柱的鍵合工藝或封尾工藝過程中，添加的特殊官能團(tuán)試劑。這些試劑的加入固然有助于分離一些本不易分離的組分，但是，在進(jìn)行常規(guī)實驗，或方法建立初期，不建議選擇添加特殊基團(tuán)的色譜柱，否則色譜分離的重現(xiàn)性可能在后續(xù)的實驗中成為潛在的問題。

怎么樣，通過上述的介紹，小伙伴是不是現(xiàn)在對色譜柱的參數(shù)有了更全面的認(rèn)識了呢，以后在選擇色譜柱的時候也會更有方向感，不會再如“霧里看花”一般不知如何選擇了吧。