Xtimate® Sugar-Ca色譜柱采用鈣化的聚苯乙烯/二乙烯基苯填料的色譜柱。主要用于分析糖類產品，甜菜，甘蔗，淀粉這些作物在水解過程中的產物，以及用來做糖產品的質量檢測，能夠將葡萄糖、果糖、麥芽糖、麥芽多糖從典型的玉米糖漿中的高聚物中分離出來，也可用于酒精的發(fā)酵過程中跟蹤監(jiān)控發(fā)酵糖的減少和酒精的產生。

使用步驟
1. 用兩通取代色譜柱將儀器連接，用過濾好的超純水沖洗儀器50ml；
2. 再用分析流動相沖洗儀器50ml，將流速降到0ml/min；
3. 將Xtimate® Sugar-Ca色譜柱連接在HPLC系統(tǒng)上；
為了保證新柱子及長時間未使用的柱子能在分析使用之前得到足夠的鈣離子的平衡，我們推薦使用以下程序：
1) 用至少100ml的0.001M EDTA鈣鹽（500mg/L）溶液在85℃用
0.2ml/min流速反沖柱子；
2) 將柱子用分析所用流動相沖柱子。
4. 設置流速在0.2-0.3ml/min直到柱溫達到設定值；
5. 在柱溫達到設定值時，流速增至分析流速，流速變化以0.1ml/min為增量，待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。zui大流速不應使壓力超過2000psi。

流動相要求
此色譜柱由鈣基樹脂填裝而成，氫離子和其它離子會取代鈣離子，或是引起與柱中糖的置換，尤其是像蔗糖這樣易于置換的糖。因此推薦在流動相中加入一定量的鈣離子來保持平衡和防止與樣品的置換。推薦的流動相用去離子的無菌水，含EDTA鈣鹽約0.0001M（50mg/L）。水應去離子化，大于2兆歐的電阻率，水中應不含多價離子 ，尤其是過渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過0.45μm或更小孔徑的濾膜除去細菌和其它顆粒，溶劑過濾推薦使用溶劑過濾器。雖然流動相已經在真空過濾時脫氣，但還是應該通過以下程序來*脫氣。如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天，請將流動相置于錐形瓶中，放在攪拌器/電爐上，用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā)，用前將流動相加熱至沸點幾分鐘，使用時保持溫度70-90℃。這個操作能夠保證氣體（尤其是CO2）不再重新溶解在流動相中，同時也會防止微生物的滋生。要保持裝流動相的容器干凈，有蓋，且新鮮，流動相需每24小時重新配制。

注意事項
通常推薦壓力不超過2000psi；
zui大流速不超過2ml/min（70℃）；
流動相中有機相的zui大含量為5%(V/V)，樣品中少量的乙腈，乙醇，甲醇和異丙醇不會影響柱子的性能；
柱子的溫度不要超過95℃。通常高溫會帶來高的分辨率，但在90-95℃之間幾乎沒有變化，70℃以下對于許多糖，就異構體的分離來說不能提供足夠的分辨率，對于乙醇的定量，柱溫應在75℃；
柱溫的快速變化不會對柱子帶來什么反作用，如果柱子在60℃以下，那么太高的流速會引入高柱壓，由于水在低溫時有高的粘度因此高的流速會帶來很高的反壓；
定期反向沖洗色譜柱（在每5L流動相之后），這將會有效地延長色譜柱的壽命；
流速的變化不能超過0.5ml/min，流速變化應該緩慢進行，建議改變流速時以0.1ml/min為增量，直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。任何的流速變化均要在不超過0.5ml/min下進行；在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設定應比普通的工作壓力高出幾百psi，從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。

保存條件
長期保存（72小時以上不用）。關掉柱溫箱，待柱溫冷卻到室溫，停泵。當柱子冷卻，從系統(tǒng)中移出，換上起初隨柱子的堵頭，柱子在保存過程中要防止揮干，通常的流動相都可作為保存柱子的適宜溶劑，在冰箱中5℃保存（不要冷凍），以防止微生物的滋生；長期保存可以使用10%乙醇作為保存溶劑。柱子拆掉后要用兩通裝在系統(tǒng)上，沖洗整個液相色譜系統(tǒng)先用水，然后用甲醇，zui后儀器系統(tǒng)保存在甲醇中。

在關機后的重新啟動。當開啟帶有一個柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時，打開柱溫箱，流速開始不要超過 0.2ml/min。待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達到工作溫度后再按通常的工作條件操作。

整夜的停機（放置少于72小時）。柱子留在系統(tǒng)中流速降到0.2ml/min。循環(huán)溶劑，將流出的管路插入流動相瓶中，如果不想開著柱溫箱，那就關掉泵和柱溫箱讓其冷卻。

在整夜停機后的開啟。打開柱溫箱，流動相的流速不要超過0.1-0.2ml/min，保持此流速至少二十分鐘直到達到柱子工作所需溫度，然后再按照通常分析條件來設置。

故障檢查
Sugar-Ca色譜柱是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的，如果樣品進行了很好的前處理，那么大部分產生的問題都和樹脂填料有關，由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加，脆弱的樹脂填料可能被泵的波動沖到柱子的后篩板處。反壓的增加是否會發(fā)生，要經常檢查在線過濾器以及保護柱中是否截留了微粒。如果不是此問題，那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處，檢查這種情況是否發(fā)生需要關掉泵，將柱子的流路方向反過來，然后泵流速開到0.1ml/min，20分鐘達到工作溫度后再設至工作時的流速。
 

柱子的再生步驟
Sugar-Ca色譜柱的再生方法根據相關的樣品純度有不同的變化，越是天然物（尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機酸的樣品），越需要經常地對柱子進行再生，因為它們會與柱子發(fā)生置換。可以通過注射蔗糖來測試柱子的置換情況。
如果蔗糖的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理:
配制500ml的再生溶液(Ca EDTA 500mg/L)，把柱子流路方向反過來，在90℃下以0.5ml/min的流速沖洗一整夜。再生之后回到正常方向使用。
當柱子反沖時很重要的一點是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗，用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程。