計(jì)算公式：

對(duì)待分離物的分離度還可以表示成如下的關(guān)系式：

接下來(lái)我們嘗試調(diào)節(jié)這三個(gè)因素，來(lái)達(dá)到最佳的色譜分離效果。

如何提高分離因子呢？在確保樣品性質(zhì)不變的情況下，主要有以下兩個(gè)方面需要考慮：

01 固定相的選擇

通常情況下，固定相材料應(yīng)該與樣品成分相互作用，以實(shí)現(xiàn)有效的分離。對(duì)于一般的疏水性樣品我們可以選擇反相色譜固定相，親水性樣品可以選擇正相色譜固定相，生物大分子可選離子交換色譜固定相，碳水化合物可用疏水作用色譜固定相，無(wú)機(jī)離子最好使用離子色譜固定相，合成聚合物最好采用凝膠色譜固定相。

02 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相的選擇首先根據(jù)固定相的類型進(jìn)行選擇，在正相色譜中，通常正己烷與異丙醇的混合物是最基本的溶劑系統(tǒng)，調(diào)節(jié)二者的比例可以改變?nèi)軇┫到y(tǒng)的極性。如果基本溶劑系統(tǒng)不能滿足分離的需要，則可以在基本溶劑系統(tǒng)中再添加其他溶劑，如甲基叔丁基醚、二氯甲烷、乙腈中的一種，或是它們的混合物等，以改變它們的選擇性。如果是反相色譜則應(yīng)該使用水+有機(jī)溶劑的系統(tǒng)，常用的有機(jī)溶劑是甲醇、乙腈以及四氫呋喃，調(diào)節(jié)它們與水之間的比例可以改變?nèi)軇┑臉O性。

在制備液相中，除了盡量讓兩個(gè)色譜峰之間具有更大距離外，還需盡量避免峰寬過度分布過寬，以保障柱效。影響柱效的主要因素包括以下幾個(gè)方面：

1. 樣品

為了提高制備目標(biāo)物的效率，通常在進(jìn)行液相進(jìn)樣時(shí)會(huì)適當(dāng)過載樣品。然而，如果樣品過度過載，則會(huì)導(dǎo)致柱效降低，分離能力下降。另外，樣品的化學(xué)性質(zhì)、濃度大小、純度、樣品在兩相中的分配比等對(duì)柱效都有影響。

2. 固定相

固定相的影響主要包括固定相的填料粒徑、分布范圍、填料的形狀、表面的化學(xué)性質(zhì)、表面積的大小、填料是否填充均勻、是否填充緊密、色譜柱尺寸等因素。

3. 柱長(zhǎng)及內(nèi)徑

短柱（15-100mm）：運(yùn)行時(shí)間短、柱壓低，常用于高通量分析和產(chǎn)量較多的分析場(chǎng)合。

長(zhǎng)柱（150-250mm）：分辨率高、運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)，適用于一些研究性的分析場(chǎng)合。

4. 流動(dòng)相

流動(dòng)相的影響因素主要包括流動(dòng)相的組成、化學(xué)性質(zhì)、粘度、擴(kuò)散性以及線速度等。

5. 流速

流速過快會(huì)對(duì)色譜分離產(chǎn)生不良影響，因?yàn)榭焖倭鲃?dòng)的溶液容易沖刷填料表面上的化學(xué)物質(zhì)。當(dāng)流速較低時(shí)，物質(zhì)在填料表面上的停留時(shí)間增加，可能導(dǎo)致物質(zhì)中的雜質(zhì)混入最終產(chǎn)物中。

6. 溫度的影響

增加溫度可以減小溶劑的粘度、增大樣品的溶解度。

容量因子：是指分離柱中目標(biāo)分子在流動(dòng)相和固定相之間定量分配的比例。容量因子的適當(dāng)增加可以改善分離的效果，由下圖可見，當(dāng)容量因子達(dá)到一定數(shù)值后，其對(duì)分離度的影響并不是很大。容量因子的增大會(huì)消耗大量的時(shí)間和溶劑，因此我們應(yīng)該避免過大增加容量因子的數(shù)值。除非待收集物是非常有價(jià)值的物質(zhì)，否則建議不要采用增加容量因子的方法。