等度洗脫VS梯度洗脫，如何選擇？

哈嘍，有液相實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都清楚，在考察液相色譜分離條件時(shí)，最重要的參數(shù)就是洗脫條件。其中洗脫條件又分為等度洗脫和梯度洗脫。下面小編就簡(jiǎn)單帶大家來(lái)看下這兩種洗脫方式的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，以及他們的適用范圍。

01、等度洗脫

是指在樣品組分的分析周期中，流動(dòng)相的組成比例和流速恒定不變的洗脫方式。

優(yōu)點(diǎn)

1、對(duì)于等度洗脫而言，由于方法運(yùn)行時(shí)，流動(dòng)相的比例不發(fā)生變化，所以它對(duì)儀器的要求不高，只需要一個(gè)單元泵就可以運(yùn)行方法。

2、由于等度洗脫條件單一，所以比較容易用來(lái)摸索方法設(shè)置，例如改變流動(dòng)相比例，改變柱溫等條件。

3、由于等度洗脫每次運(yùn)行時(shí)的流動(dòng)相比例相同，所以相同方法運(yùn)行多個(gè)樣品時(shí)，樣品之間不需要設(shè)置平衡時(shí)間來(lái)讓系統(tǒng)恢復(fù)到所需的流動(dòng)相比例。

缺點(diǎn)

1、越往后出峰的組分色譜峰越寬。

2、并且大多數(shù)等度洗脫的方法分析時(shí)間較長(zhǎng)。

02、梯度洗脫

是指在同一個(gè)分析周期中，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比的洗脫方式。

優(yōu)點(diǎn)

1、梯度洗脫能夠規(guī)避掉等度洗脫的問(wèn)題，例如梯度洗脫的樣品峰，無(wú)論先出峰還是后出峰的組分，它們的峰形基本都能保證尖銳對(duì)稱。

2、由于梯度洗脫通常設(shè)置的流動(dòng)相比例是讓洗脫強(qiáng)度越來(lái)越強(qiáng)，這樣能保證在較短的時(shí)間內(nèi)，讓樣品中強(qiáng)保留組分也能被洗脫出來(lái)。

缺點(diǎn)

1、如果在運(yùn)用梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相比例變化過(guò)快，可能產(chǎn)生鬼峰影響檢測(cè)。

2、梯度洗脫對(duì)儀器的配置要求較高，通常需要配置四元泵或者二元泵。

3、梯度洗脫每次運(yùn)行樣品之間，需要設(shè)置一定的平衡時(shí)間，來(lái)讓系統(tǒng)中流動(dòng)相的比例到達(dá)初始流動(dòng)相比例。

4、梯度洗脫的方法設(shè)置復(fù)雜，例如影響分離的：有初始流動(dòng)相比例、流動(dòng)相的梯度變化、結(jié)束流動(dòng)相比例、柱溫箱溫度等，所以方法的開發(fā)和優(yōu)化會(huì)較為復(fù)雜。

03、適用范圍

用梯度洗脫還是等度洗脫，主要看雜質(zhì)與雜質(zhì)、主峰、溶劑峰的分離的情況。同一物質(zhì)有梯度洗脫和等度洗脫兩種條件時(shí)，梯度洗脫的認(rèn)可度較高。下面就是更適合梯度洗脫的適用情況。

1、多組分樣品的極性范圍大，用等度無(wú)法全部洗脫的樣品。

第一種情況：雜質(zhì)和主成分極性相差很大，長(zhǎng)時(shí)間雜質(zhì)未能洗脫出來(lái)，就必須考慮用梯度。

第二種情況：雜質(zhì)極性比主峰的大，等度時(shí)要想主峰時(shí)間合適雜質(zhì)全堆在前邊，雜質(zhì)分開主峰又出峰太晚，這種情況也得考慮梯度洗脫。

2、大分子量樣品（肽、蛋白質(zhì)、合成聚合物等）一般采用梯度洗脫分離會(huì)更好，尤其是反相條件。這類樣品，往往對(duì)有機(jī)相的量特別敏感，有機(jī)相的微小變化就會(huì)使樣品的保留時(shí)間發(fā)生很大的變化，導(dǎo)致用等度條件檢測(cè)時(shí)，無(wú)法使保留時(shí)間控制在一個(gè)穩(wěn)定合適的范圍內(nèi)。

3、改善峰型。

4、目標(biāo)峰出峰后，短時(shí)間內(nèi)提高有機(jī)相比例，洗脫強(qiáng)保留干擾雜質(zhì)。

5、用等度洗脫無(wú)法達(dá)到分離的情況。有些物質(zhì)，特別是結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)，等度條件下無(wú)法達(dá)到分離，而采用梯度模式，因組分在有機(jī)相變化的選擇性差異，可以達(dá)到分離，這種情況下就需要采用梯度條件進(jìn)行測(cè)試。