在HPLC中，流動相是純溶劑或者混合溶劑以及帶有固體改性劑的溶劑。色譜工作者可以針對HPLC的不同應用在數百種溶劑中進行選擇。溶劑的選擇要考慮諸多因素，如溶劑的粘度、折射率、腐蝕性、透明度等，還有商業價格。流動相的溶劑強度或有機溶劑百分比可控制分析物的保留時間。
1、什么是流動相
流動相是使分析物通過色譜柱的溶劑。分析物存在于適當的溶劑中，在樣品制備后注入色譜柱系統。該溶劑不被視為新基質，因為它不會干擾分析。可以在樣品制備過程中選擇分析物的載體的性質，以滿足特定要求，例如揮發性和與HPLC中流動相的混溶性。在反相色譜柱中，流動相比固定相更具極性。一般來說極性流動相是shou選，因為分離效果表現出更好的重現性。
分析物在流動相中的溶解度在色譜柱中也起著重要作用。對于溶于水或部分水性溶劑的化合物，選擇反相HPLC不是問題，但對于不溶于極性溶劑的化合物，通常需要使用正相色譜柱。樣品極性，固定相極性和流動相極性的評估對于色譜柱的選擇也很重要。
2、流動相的一般選擇要求
純度
所有溶劑都應該具有最高的純度和質量。HPLC級溶劑經過預過濾和純化，在紫外線下具有最小的吸光度。因此，他們不含會在色譜圖基線中產生假峰的雜質。緩沖液制備中使用的水具有最高純度。去離子水通常含有痕量有機化合物，因此不推薦用于HPLC。
粘度
為了保持可接受的壓降（＜2500psi）和合理的流過HPLC色譜柱的流速，流動相粘度應盡可能低。較低粘度的流動相產生狹窄的色譜峰。例如乙腈通常是反相HPLC的shou選溶劑，因為它不僅粘度低于甲醇或異丙醇，而且具有良好的保留特性。
沸點
如果涉及樣品回收，沸點很重要，低沸點溶劑更容易從樣品中去除。
無腐蝕性
溶劑必須對HPLC系統組件無腐蝕性。
混溶性
并非所有HPLC溶劑都可混溶。如果混合了不能混合的溶劑可能會導致一些問題，例如不穩定的基線，波動的壓力等。異丙醇可與大多數常見的HPLC溶劑混溶。因此，在不確定最后使用的溶劑系統的情況下，它可以用來沖洗HPLC的流路
