T-2毒素免疫親和柱測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗T-2毒素的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的T-2毒素經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過T-2毒素免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，T-2毒素與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。最后采用甲醇洗脫T-2毒素，然后進(jìn)行相關(guān)分析。

親和柱活化→上樣→淋洗→洗脫

活化：3mL柱管上方堵頭直接連接20mL針筒固定后使用，棄去保存液；

上樣：準(zhǔn)確移取上述混勻濾液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱，棄去；

淋洗：用20mL水沖洗柱子，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體；

洗脫：用3mL甲醇洗脫并收集洗脫液于15mL 離心管中。50℃水浴氮氣吹干洗脫液。用75%乙腈水溶液定容至1mL，過0.22μm有機(jī)濾膜，上機(jī)檢。

色譜條件：

色譜柱：月旭Boltimate^® C18，2.1×100mm，2.7μm。

流動相：流動相A：10mmol/L 乙酸銨溶液 流動相B：甲醇；

流速：0.2mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：2μL；

運行梯度：

Welchrom^® T-2毒素免疫親和柱在《GB 5009.118-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中T-2毒素的測定》標(biāo)準(zhǔn)下測試，樣品加標(biāo)回收率達(dá)到95.7%，滿足實驗要求。