反相離子對色譜法建立的注意事項（四）

大家看過之前的文章后，對反相離子對色譜法已經有很清晰的認識了，今天小編為大家分享一個實際案例：

色譜柱：Ultimate^® LP-C18（4.6×250mm，5μm）。

流動相：0.1%七氟丁酸溶液/乙腈；

檢測波長：210nm；

柱溫：30℃；

流速：1mL/min；

進樣量：10μL。

討論：

甲酰肼與4-氨基三氮唑合并，3-氨基三氮唑峰前有倒峰干擾，三氮唑峰型不好，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對試劑濃度。

流動相：0.3%七氟丁酸溶液/乙腈

討論：

增加離子對試劑濃度分離效果和基線都得到很好的改善，但約9分鐘處有倒峰，甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離，增加離子對試劑中碳原子的數量。

流動相：10mmol/L KH₂PO₄(含1g/L辛烷磺酸鈉，pH1.6)/乙腈=85/15 

討論：

改用辛烷磺酸鈉以后無改善，改變離子對試劑種類。

流動相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=90/10

討論：

第一，二個峰分離良好，其他物質需要改善，調整有機相的比例。

流動相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸鈉，pH1.5)/乙腈=95/5

測試結果：

保留及分離情況均良好，分離*，三氮唑峰形能滿足峰面積定量要求。

討論：

在分離甲酰胺等6個物質時，這幾個均為極性較大，反相色譜上保留弱，要達到六個成分的分離，首先需增加其保留，再根據情況，調整離子對試劑的量，pH值，有機相種類與濃度以達到分離，在實驗中選擇了耐受強酸條件的Ultimate^® LP-C8（pH耐受范圍0.5-8）柱，通過調整離子對試劑的種類，濃度，有機相的比例，使得各物質得到良好的分離，滿足日常檢測需求。