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SN/T 2229-2008 茶葉中稻瘟靈測定操作要點及優化

更新時間:2021-12-07 點擊次數:1623

在稻瘟靈的檢測中,我們進行了多種不同基質的實驗方案探究包括大米、龍利魚、茶葉等,本次解析以茶葉中稻瘟靈的測定為例。


一、提取步驟   

稱取試樣5g,加入5g無水硫酸鈉和20mL乙腈,渦旋混勻2min。超聲提取10min,8000 rpm離心5min,將上清液通過通過裝有無水硫酸鈉的濾紙過濾脫水于100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復提取一次,合并提取液于100mL濃縮瓶中,在旋轉蒸發器上45℃濃縮至干,加入6mL正己烷溶解殘渣待凈化。

原標準中的提取步驟為:

試樣稱取2g,加入4mL飽和氯化鈉溶液,渦旋混勻0.5min。放置0.5h,加入20mL乙腈,用均質器以10000r/min均質2min,4000rpm離心5min,將上清液轉移至100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復提取一次,合并提取液于100mL濃縮瓶中,在旋轉蒸發器上55℃濃縮約5mL,濃縮提取液轉移至250mL分液漏斗中,加入100mL硫酸鈉溶液和40mL正己烷,振搖2min,靜置分層,將上清液通過將上清液通過裝有無水硫酸鈉的濾紙過濾脫水于200mL濃縮瓶中。再用40mL正己烷重復提取一次,合并提取液于200mL濃縮瓶中,45℃旋轉濃縮至干,加入5mL正己烷溶解殘渣待凈化。

本實驗針對原標準進行了以下分析及優化:

在實際茶葉樣品的操作中,標準中采用了乙腈提取,再將提取液轉移至分液漏斗中,加入硫酸鈉溶液和正己烷進行液液萃取,溶劑置換為正己烷后進行旋蒸濃縮,然后再進行過柱凈化,但我們按標準的操作步驟實際進行操作發現,回收率只有60%,我們進行了減少稱樣量、增加正己烷體積等操作,發現均不能得到很好的實驗結果。因此我們采用去掉正己烷萃取這一操作,只用乙腈進行提取,同時將無水硫酸鈉代替飽和氯化鈉溶液,以達到更好的除水效果,按此方案得到的回收率為103%。


二、SPE凈化步驟   


標準中采用石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯凈化后,再用HLB固相萃取柱進行凈化,具體操作如下:

SPE柱:石墨炭黑柱,1000mg/6mL;弗羅里硅土柱,1000mg/6mL。

活化:3mL丙酮、5mL正己烷;

上樣:待凈化液全部上樣,棄去流出液;

洗脫:石墨炭黑柱與弗羅里硅土柱串聯后,加入10mL正己烷-丙酮(8:2)洗脫,收集流出液,洗脫液經60℃氮吹儀吹干,用6mL 30%甲醇溶液溶解殘渣轉移到HLB固相萃取柱中;

活化:3mL甲醇、3mL水;

上樣:待凈化液全部上樣,棄去流出液;

洗脫:加入14mL 80%甲醇溶液洗脫,收集流出液。

洗脫液經60℃氮吹至約3mL后,加入5mL正己烷和5mL硫酸鈉水溶液,渦旋混勻,3000r/min離心3min,取上清液上機測定。

但在實際進行操作中,我們采用Carb、Florisil PR、BRP固相萃取柱進行凈化操作時,發現回收率只有70%左右,而去掉BRP固相萃取柱后,回收率為105%,且上機測定發現用Carb、Florisil PR柱已經可以達到凈化效果,因此在我們的實驗方案中去掉了BRP固相萃取柱。

具體前處理實驗過程和結果如下:

SPE柱:Welchrom® Carb,規格:1000mg/6mL;Welchrom® Florisil PR,規格:1000mg/6mL。

活化:3mL丙酮,5mL正己烷,棄去;

上樣:待凈化液全部上樣,控制流速在1mL/min~2mL/min,棄去流出液;

洗脫:石墨炭黑柱柱與弗羅里硅土柱串接,加入10mL正己烷-丙酮(8:2)溶液洗脫,控制流速在1mL/min~2mL/min,收集流出液于15mL離心管中;

復溶:60℃氮吹至干,準確加入1mL正己烷溶解殘渣,過0.22μm有機系濾膜后上GC檢測。

三、色譜條件   

色譜柱:WM-1701,30m×0.32mm×0.25μm。

升溫程序:150℃(4min),30℃/min上升至260℃(5min),20℃/min升至270℃(10min);

進樣口:260℃,分流進樣,分流比:20:1;

檢測器:350℃;

進樣量:1μL;

載氣流量:1.0mL/min。

四、色譜圖及加標回收率結果


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