蛋白純化之蛋白電泳介紹

蛋白電泳（SPE）作為一種蛋白質的分析技術，蛋白質在緩沖液中帶負電荷或正電荷，在電場中向陽極移動稱為電泳，不同的蛋白質分子具有不同的電泳遷移率。常見的蛋白電泳有紙電泳、淀粉凝膠電泳、瓊脂糖凝膠電泳、醋酸纖維凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳。

其中十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱SDS-PAGE）是聚丙烯酰胺凝膠電泳中zui常用的一種蛋白表達分析技術。此項技術的原理，是根據檢體中蛋白質分子量大小的不同，使其在電泳膠中分離。

蛋白中含有很多的氨基(+)和羧基(-)，不同的蛋白在不同的pH值下表現出不同的電荷，為了使蛋白在電泳中的遷移率只與分子量有關，我們在上樣前，通常會進行一些處理(上樣緩沖液)。即在樣品中加入含有SDS 和β-巰基乙醇的上緩沖液。

SDS 即十二烷基磺酸鈉（CH₃-(CH₂)₁₀-CH₂OSO₃- Na+），是一種陰離子表面活性劑，它可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構；β-巰基乙醇是強還原劑，它可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵。

電泳樣品加入樣品處理液后，經過高溫處理，其目的是將SDS與蛋白質充分結合，以使蛋白質*變性和解聚，并形成棒狀結構同時使整個蛋白帶上負電荷；另外樣品處理液中通常還加入溴酚藍染料，用于監控整個電泳過程；另外樣品處理液中還加入適量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加樣時樣品溶液可以快速沉入樣品凹槽底部。當樣品上樣并接通兩極間電流后(電泳槽的上方為負極，下方為正極)，在凝膠中形成移動界面并帶動凝膠中所含SDS負電荷的多肽復合物向正極推進。樣品首先通過高度多孔性的濃縮膠，使樣品中所含SDS多肽復合物在分離膠表面聚集成一條很薄的區帶（或稱積層）。當蛋白質進入分離膠時，其他離子在pH8.8的溶液中，很快到達正極，只有蛋白質分子在分離膠中較為緩慢的移動。由于蛋白質在電泳過程中，受到溶液離子的變化而pH值發生變化，但每一瞬間，其所帶電荷數除以單位質量是不同的，所以帶負電荷多者遷移快，反之則慢，這就現了電荷效應。由于膠孔徑小，而且成為一個整體的篩狀結構，它們對大分子阻力大，小分子阻力小，起著分子篩效應，也就是蛋白質在分離膠中，以分子篩效應和電荷效應而出現遷移率的差異，最終達到彼此分開。

蛋白電泳是蛋白純化后期檢測的方法之一，整個的蛋白純化前期對于填料的選擇是至關重要的。月旭科技推出的蛋白純化填料包括凝膠過濾層析介質、離子交換層析介質、疏水作用層析介質、親和層析介質等，分離效果好，性價比高，是你的優選。